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细菌基因组DNA快速提取试剂盒图片
产品货号:
KD2174
中文名称:
细菌基因组DNA快速提取试剂盒
英文名称:
Bacteria gDNA Extract Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本细菌基因组DNA快速提取试剂盒不含巯基乙醇等刺激性试剂,对人体无害。 对于革兰氏阴性菌可以在30min内完成实验,对于阳性菌可以在1h之内完成实验。 提取的DNA OD260/280一般在1.8以上,可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。




组分规格
裂解液I15mL
纯化液II8mL
结合液III30mL
洗涤液50mL
洗脱液(TE)10mL
硅胶膜DNA吸附柱50套
溶菌酶干粉600mg

保存:室温,有效期1年,其中溶菌酶-20℃保存。

注意事项:
  • 裂解液I和纯化液II容易产生沉淀,纯化液II比较粘稠,用前均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分摇匀。
  • 自备试剂:氯仿。



  • 对革氏阴性细菌样品(无需溶菌酶)。
    • 将0.1~1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL塑料离心管中,12000rpm室温离心1min沉淀细菌,弃上清。
    • 加入300μL预热的裂解液I到细菌沉淀中,充分吹打均匀。
    • 再加入150μL预热的纯化液II到离心管中,颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。
      由于纯化液II比较粘稠,可以采取称量方法取用,150μL约等于150~160mg。也可以将1mL枪头剪去一截再吸取。
    • 65℃放置3~5min。如果室温放置,DNA产量会降低10~20%。
    • 加入200μL自备氯仿,震荡混匀10~30秒,此时溶液将呈乳白色。
    • 12000rpm室温离心2min。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中,避免触及中间层的白膜。
    • 加入1.5倍体积(约0.7mL)的结合液III,颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中,室温放置至少2min。
    • 12000rpm室温离心1min,DNA将吸附在离心吸附柱的膜上,弃掉收集管中的穿透液。
    • 在吸附柱中加入500μL洗涤液,12000rpm离心1min,弃穿透液。
    • 再将吸附柱12000rpm离心30 s以甩干乙醇。
    • 将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中。在吸附柱中央加入50μL洗脱液(65~70℃预热),室温静置5min。12000rpm离心2min。将穿透液重新加入吸附柱中央,12000rpm离心1min以洗脱更多基因组DNA。
    • 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20℃冰箱。
  • 对革氏阳性细菌样品(需用溶菌酶处理)。
    • 将0.1~1.5mL过夜培养的革氏阳性细菌12000rpm室温离心1min后,重悬于0.6mL溶菌液中(溶菌液配制:30mL无菌水+600mg溶菌酶,配制后最好分装成小管并放-20℃长期保存,每次只用一小管),颠倒混匀5~10次后放37℃保温至少30min。(有的革氏阳性菌种可能需更长时间,需要自己根据不同的细菌摸索)。
    • 12000rpm室温离心10min,小心弃上清。
    • 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。

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